菌落總數(shù)檢測(cè)儀主要用于計(jì)數(shù)培養(yǎng)基培養(yǎng)出來(lái)的菌落群,為壓力感應(yīng)式,適用各種計(jì)數(shù)筆,壓力敏感度可調(diào)。*的按鈕設(shè)計(jì),計(jì)數(shù)錯(cuò)誤時(shí),可將數(shù)值往后退。配有可調(diào)節(jié)的培養(yǎng)皿支架以及非閃爍式圓形燈管,減少眼睛的疲勞。
對(duì)于菌落總數(shù)的計(jì)數(shù)方法有很多,今天我們主要介紹幾種常見(jiàn)的:
1.染色計(jì)數(shù)法
為彌補(bǔ)一些微生物在油鏡下不易觀察計(jì)數(shù),而直接用血球計(jì)數(shù)板法又無(wú)法區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的不足,人們發(fā)明了染色計(jì)數(shù)法,借助不同的染料對(duì)菌體進(jìn)行適當(dāng)?shù)娜旧梢愿奖愕脑陲@微鏡下進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。如酵母活細(xì)胞計(jì)數(shù)可用美藍(lán)染色液,染色后在顯微鏡下觀察,活細(xì)胞為無(wú)色,而死細(xì)胞為藍(lán)色。
2.比例計(jì)數(shù)法
將已知顆粒濃度的液體與一待測(cè)細(xì)胞濃度的菌液按一定比例均勻混合,在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目,即可得未知菌液的細(xì)胞濃度,這種計(jì)數(shù)方法比較粗放,并且需要配制已知顆粒濃度的懸液做標(biāo)準(zhǔn)。
3.液體稀釋法
對(duì)未知菌樣做連續(xù)十倍系列稀釋?zhuān)鶕?jù)估計(jì)數(shù),從適宜的三個(gè)連續(xù)的10倍稀釋液中各取5毫升試樣,接種1毫升到3組共15只裝培養(yǎng)液的試管中,經(jīng)培養(yǎng)后記錄每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長(zhǎng)的試管數(shù),然后查大或然數(shù)表MPN得出菌樣的含菌數(shù),根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)計(jì)算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測(cè),例如飲用水和牛奶的微生物*。
4.平板菌落計(jì)數(shù)法
這是一種常用的活菌計(jì)數(shù)法。將待測(cè)菌液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)∫欢w積的稀釋菌液與合適的固體培養(yǎng)基在凝固前均勻混合,或?qū)⒕和坎加谝涯痰墓腆w培養(yǎng)基平板上。保溫培養(yǎng)后,用平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)乘以菌液稀釋度,即可算出原菌液的含菌數(shù)。一般以直徑9cm的平板上出現(xiàn)50-500個(gè)菌落為宜。但方法比較麻煩,操作者需有熟練的技術(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數(shù),而且同時(shí)將菌液中的細(xì)菌進(jìn)行了一次分離培養(yǎng),獲得了單克隆。
5.試劑紙法
在平板計(jì)數(shù)法的基礎(chǔ)上,發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計(jì)數(shù)用。形式有小型厚濾紙片,瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養(yǎng)基,其中加入活性指示劑2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC,無(wú)色)待蘸取測(cè)試菌液后置密封包裝袋中培養(yǎng)。短期培養(yǎng)后在濾紙上出現(xiàn)一定密度的玫瑰色微小菌落與標(biāo)準(zhǔn)紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計(jì)數(shù)快捷準(zhǔn)確,相比而言避免了平板計(jì)數(shù)法的人為操作誤差。